細(xì)胞名稱:小鼠表皮細(xì)胞JB6Cl30-7b
產(chǎn)品規(guī)格:T25培養(yǎng)瓶x1;1.5ml凍存管x2
細(xì)胞數(shù)量:1x10^6;1x10^6
保存溫度:37℃;-198℃
運(yùn)輸方式:常溫保溫運(yùn)輸;干冰運(yùn)輸
安全等級:1
用途限制:僅供科研2類
培養(yǎng)體系:DMEM高糖培養(yǎng)基(Hyclone)+10%胎牛血清(Gibco)+1%雙抗(Hyclone)
培養(yǎng)溫度:37℃
二氧化碳濃度:5%
簡介:小鼠表皮細(xì)胞JB6Cl30-7b細(xì)胞取自ICR小鼠,貼壁培養(yǎng),不規(guī)則形態(tài)。
注釋:倍增時間46h。
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參考文獻(xiàn)
Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表達(dá)
,PP.631-635
陳年,伍津津,邱偉明,唐輝,唐書謙
Keywords:Frizzled,毛囊,小鼠,Wnt,抗體
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Abstract:
目的探討Wnt蛋白的受體分子Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表達(dá)、功能及其意義。方法利用實(shí)時定量PCR、RT-PCR、Westernblot和免疫熒光等技術(shù)分別檢測Frizzled4mRNA和蛋白在毛囊生長期(P1d、P3d、P8d)、退化期(P16d)和靜止期(P21d)中的表達(dá)。免疫熒光技術(shù)檢測Frizzled4在小鼠皮膚上皮細(xì)胞JB6cl30-7b中的定,位,MTT檢測用抗Frizzled4抗體處理JB6cl30-7b細(xì)胞后的增殖情況。結(jié)果在毛囊生長期早期,F(xiàn)rizzled4mRNA和蛋白在P1d的小鼠背部皮膚中表達(dá)明顯,膜表達(dá)于Bulge、毛囊外根鞘及毛球外側(cè)。在P3d,F(xiàn)rizzled4蛋白表達(dá)明顯上調(diào),主要表達(dá)于Bulge、毛囊外根鞘、內(nèi)根鞘、precortex、部分毛球外側(cè)。在生長中期(P8d),F(xiàn)rizzled4蛋白的表達(dá)最強(qiáng),集中在毛囊Bulge、外根鞘上段及內(nèi)根鞘。當(dāng)毛囊進(jìn)入退化期(P16d),F(xiàn)rizzled4mRNA和蛋白的表達(dá)顯著降低(P<0.05),此時主要定,位于Bugle。而在靜止期,F(xiàn)rizzled4mRNA和蛋白表達(dá)最低(P<0.05),只有少量Frizzled4陽性細(xì)胞出現(xiàn)在毛囊Bulge。免疫熒光技術(shù)檢測Frizzled4蛋白同樣也在JB6cl30-7b細(xì)胞膜中表達(dá)。MTT結(jié)果顯示與對照組相比,10μg/mL的抗Frizzled4抗體處理JB6cl30-7b細(xì)胞后光密度值明顯降低(P<0.05),而20μg/mL的抗Frizzled4抗體處理后的光密度值降到最低(P<0.05)。結(jié)論Frizzled4在毛囊周期中的表達(dá)具有時空特異性。伴隨著毛囊的生長,F(xiàn)rizzled4的mRNA和蛋白水平都呈現(xiàn)高表達(dá),隨著毛囊的退化而表達(dá)降低,直至靜止期維持低表達(dá)水平。拮抗Frizzled4蛋白的作用促使細(xì)胞增殖受到明顯抑制,提示Frizzled4的表達(dá)與毛囊細(xì)胞的增殖和分化相關(guān)。
驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng)
1、收到小鼠表皮細(xì)胞JB6Cl30-7b細(xì)胞,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快聯(lián)系。
2、收到小鼠表皮細(xì)胞JB6Cl30-7b細(xì)胞,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時,請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理。
3、收到小鼠表皮細(xì)胞JB6Cl30-7b細(xì)胞后,請鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請離心收集細(xì)胞,接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右,血清濃度還是在10%。
4、收到小鼠表皮細(xì)胞JB6Cl30-7b細(xì)胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
6、24小時后,小鼠表皮細(xì)胞JB6Cl30-7b細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,即可傳代。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之完全脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
7、貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時,換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
特別提醒:原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用,請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。